Desenvolvemento dun método ELISA indirecto para a detección de anticorpos IgG do coronavirus da síndrome de diarrea aguda porcina baseado na proteína espiga recombinante

O coronavirus da síndrome de diarrea aguda porcina (SADS-CoV) é un coronavirus patóxeno entérico porcino recentemente descuberto que pode causar diarrea acuosa nos leitóns recentemente nados e causar importantes perdas económicas para a industria porcina.Na actualidade, non existe un método serolóxico axeitado para avaliar a eficacia da infección e da vacina SADS-CoV, polo que hai unha necesidade urxente de utilizar un ensaio inmunoabsorbente ligado a encima (ELISA) eficaz para compensar esta deficiencia.Aquí, construíuse un plásmido recombinante que expresa a proteína pico (S) SADS-CoV fusionada co dominio Fc de IgG humana para producir baculovirus recombinante e expresouse en células HEK 293F.A proteína S-Fc purifícase con resina de proteína G e mantén a reactividade cos anticorpos anti-Fc humano e anti-SADS-CoV.Despois utilizouse a proteína S-Fc para desenvolver ELISA indirecto (S-iELISA) e optimizar as condicións de reacción do S-iELISA.Como resultado, ao analizar o valor OD450nm de 40 soros negativos SADS-CoV confirmados mediante un ensaio de inmunofluorescencia (IFA) e Western blot, determinouse que o valor de corte era 0,3711.O coeficiente de variación (CV) dos 6 soros positivos para SADS-CoV dentro e entre carreiras de S-iELISA foron todos inferiores ao 10%.A proba de reactividad cruzada mostrou que S-iELISA non ten reactividad cruzada con outros soros de virus porcinos.Ademais, segundo a detección de 111 mostras de soro clínico, a taxa de coincidencia global de IFA e S-iELISA foi do 97,3%.A proba de neutralización do virus con 7 valores de OD450nm diferentes de soro mostrou que o valor de OD450nm detectado por S-iELISA estaba correlacionado positivamente coa proba de neutralización do virus.Finalmente, realizouse S-iELISA en 300 mostras de soro de granxa porcina.Os kits comerciais doutros enterovirus porcinos mostraron que as taxas positivas de IgG de SADS-CoV, TGEV, PDCoV e PEDV foron do 81,7%, 54% e 65,3%, respectivamente., 6%, respectivamente.Os resultados mostran que o S-iELISA é específico, sensible e reproducible, e pode usarse para detectar a infección por SADS-CoV na industria porcina.Este artigo está protexido por dereitos de autor.todos os dereitos reservados.